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差速离心法和密度梯度离心法  

2015-11-09 22:18:28|  分类: My边教边学 |  标签: |举报 |字号 订阅

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    超速离心是分离亚细胞及蛋白质大分子的有效手段,往往是进一步纯化的第一次过筛。超速离心又分差速离心和梯度离心。

 

      差速离心法是采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心,使沉降速度不同的颗粒,在不同离心速度和不同离心时间下分批分离的一种方法,又称差分离心或差级离心,是生物技术中一种离心分离颗粒性物质的方法。被离心物质所受到的离心力与该物质的质量、体积、密度、离心角速度以及旋转半径呈正比关系,离心力越大,被离心物质沉降得越快。操纵过程中一般是在离心后用倾倒的办法把上清液与沉淀分开,然后将上清液加高转速离心,分离出第二部分沉淀,如此往复加高转速,逐级分离出所需要的物质。通常两个组分的沉降系数差在10倍以上时可以用此法分离。差速离心方法较简单,但分辨率不高,沉淀系数在同一个数目级内的各种粒子不轻易分开,因此常用于其他分离手段之前的粗制品提取,例如用差速离心法分离已破碎的细胞各组份。

 

        密度梯度离心法又称区带离心法,是将样品加在惰性梯度介质(蔗糖、甘油、氯化铯等)中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。离心时先将样品溶液置于一个由梯度材料形成的密度梯度(由管口到管底逐步升高的密度梯度)液体柱中,离心后被分离组分以区带层分布于密度与其相当的梯度柱层中。密度梯度离心法需要制备惰性梯度介质溶液、操作严格且离心时间较长,但此方法由于分辨率高,因此常用于颗粒和分子性物质的提纯,如DNA半保留复制的研究实验。

 

    差速离心法和密度梯度离心法最大的区别在于:差速离心法是根据物质的质量不同确定不同的转速产生不同强度的离心力进行逐次分离;而密度梯度离心法主要是根据物质的密度不同采用一定的转速将其分配定位(下沉或上浮)到与其对应的介质密度区带上。(网络整理)

 

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