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PCR引物设计基本要求  

2014-02-15 20:35:03|  分类: My边教边学 |  标签: |举报 |字号 订阅

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1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内。

2.碱基要随机分布,尽量均匀。

3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大,最好跨外显子接头区。

4G+C含量在40%~60%之间,45-55%最佳。

5.引物自身不能有连续4个碱基的互补,引物之间不能有连续4个碱基的互补。

63′端不可修饰,不要以A结尾,避开密码子的第3位,避开T/CA/G连续结构(2-3个)。

7.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70%。

8两种引物浓度要相当且适宜。

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